1.研究目的
选用费氏弧菌作为受试菌种,采用LUMIStox300毒性分析仪,分析硝化细菌菌剂急性毒性,评价硝化细菌菌剂安全性。
2. 材料与方法
2.1 实验仪器
LUMIStox300毒性分析仪。
2.2实验材料
(1)费氏弧菌:进口费氏弧菌冻干粉(-18℃保藏),购于HACH公司。
(2)硝化细菌菌剂:氨氧化细菌和亚硝酸盐氧化细菌的混合培养物。
(3)参比溶液:2%NaCl溶液。
2.3 研究方法
将费氏弧菌冻干粉取出,使用2%NaCl溶液0℃复苏10min,室温复苏5min。取1ml稀释,制备相对发光值(LU)在200~1000范围的菌悬液备用。
在发光细菌测试中,EC值是指导致20%抑制率(EC20)或50%抑制率(EC50)时的样品浓度。样品稀释梯度选择上限值9个。
3. 结果及讨论
3.1 筛检测量结果
接触时间为5min、10min、15min时,硝化细菌样品溶液相对参比溶液的发光抑制百分率分别为-75.69%、-0.10%、11.29%。前两项在较短的接触时间内抑制率都小于0,证明没有抑制效果产生。说明适当的增加接触时间可以提高测试的灵敏度。因此,确定在EC测量时选用15min和30min作为接触时间。
3.2 EC测量结果
对15min和30min两个接触时间分别进行两次测定,抑制率取平均值,分别与样品稀释浓度比例作图,结果见图1和图2。
从图中可以看出,15min和30min抑制率均在20%以下。15min回归方程R值较小,为0.355,说明抑制率和样品浓度间线性关系不明显。样品在不稀释时y值最大,为9.4%,因此不会出现抑制率为20%或50%的15min EC20或15min EC50值。30min的回归方程R值为0.883,R值较大,抑制率和样品浓度比例之间的线性关系显著。x最大取值为1时,y最大值为24.8%。因此,30min接触时间内不会出现抑制率为50%的30min EC50值。将y=20%代人回归方程,得30min EC20值为样品74.6%的稀释液。
4. 结论
经过EC测定结果显示,15min接触时间内,发光细菌受抑制率与样品浓度比例线性关系不明显,发光抑制率在20%以下,不存在抑制率EC20或EC50。30min接触时间内,抑制率与样品浓度间线性关系明显,但仍不存在EC50值,EC20值为74.6%的样品稀释比率。证明硝化细菌菌剂具有一定的生态安全性。